vcvetu.ru:
Советы
Доклады
Лекции

Растения
Цветы
Дерьвья
Огород
Удобрения
Уход

опубликовать

Коксиеллез-ассоциированная инфекция крупного рогатого скота и усовершенствование лабораторных методов ее диагностики


Скачать 451.83 Kb.
НазваниеКоксиеллез-ассоциированная инфекция крупного рогатого скота и усовершенствование лабораторных методов ее диагностики
страница1/2
Дата22.04.2013
Размер451.83 Kb.
ТипТексты
vcvetu.ru > Цветы > Тексты
  1   2

На правах рукописи



Наконечный Олег Игоревич

«Коксиеллез-ассоциированная инфекция крупного рогатого скота и усовершенствование лабораторных методов ее диагностики»

16.00.03. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук


Омск – 2009

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»
Научные руководитель: доктор ветеринарных наук профессор

Красиков Александр Пантелеевич
Научный консультант: доктор медицинских наук профессор

Рудаков Николай Викторович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук профессор

Сидоров Геннадий Николаевич
доктор ветеринарных наук профессор

Бажин Михаил Аристоклевич

Ведущее учреждение Институт экспериментальной ветеринарии

Сибири и Дальнего Востока (ИЭВС и ДВ)

СО РАСХН


Защита состоится 25 декабря 2009 г. в 12.30 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.050.03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» в институте ветеринарной медицины по адресу: 644122, г. Омск-122, ул. Октябрьская, 92, тел.: (3812) 23-74-71.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института ветеринарной медицины ОмГАУ.
Автореферат разослан «23» ноября 2009 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета, доцент Н. П. Жабин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. На протяжении всего времени сущест­вования человечества остается серьезной проблема борьбы с опасными инфекцион­ными болезнями. Даже при условии их успешной профилактики угроза вспышек не теряет актуальности. Это, в первую оче­редь, связано с тем, что ряд болезней от­носится к убиквитарным, их возбудители в традиционных нормальных условиях су­ществования закономерно переживают в организме животных. При концентрации на ограниченных площадях и ухудшении окружающих условий, способствующих снижению резистентности организма, эти животные могут тяжело переболевать со­ответствующими болезнями. (Л. Д. Тимченко и др., 2008).

Одной из таких патологий является широко распространенная во всех странах мира зооантропонозная природно-очаговая болезнь коксиеллез (Ку-лихорадка). Она выявлена на территории бывшего СССР и более чем в 50 субъектах Российской Федерации (И. В. Тарасевич, 2003; К. М. Лобан и др., 2002 и др.). У сельскохозяйственных животных болезнь протекает энзоотически, преимущественно бессимптомно с накопле­нием специфических антител в крови и аллергизацией организма (Р. Г. Госманов и др., 1985; Р. X. Юсупов, 1987; Р. И. Ситдиков и др., 1989). Крупный рогатый скот весьма восприимчив к Ку-риккетсиальной инфекции (Ю. С. Башалов, 1973).

Одним из серьезных пробелов в изучении лихорадки Ку является отсутствие подробных данных по ее краевой эпизоотологии. Значительным тормозом в профилактике и ликвидации этой болезни становится недостаточно высо­кая ценность диагностических методов и диагностикумов (Р. Р. Юсупов, 1995).

В настоящее время в ветеринарной практике для серологической диагностики коксиеллеза крупного рогатого скота рекомендована РСК, которая, дает положи­тельные результаты только при наличии определенной концентрации антител в сыворотке крови подозреваемых в заражении животных. Причем, по данным Б. П. Богомолова и др. (1980), Н. П. Петровой и др. (1982) с помощью РСК Ку-лихорадку удается диагностировать лишь в 70% случаев у больных людей. Такой метод как биологическая проба на белых мышах и морских свинках требует продолжительного времени наблюдения за подопыт­ными животными – до 12-24 суток. С другой стороны, такой тест как ПЦР является высокочувствительным, однако в силу необходимости специального оборудования, значительной стоимости исследованных проб его проводят в основном для научных целей, поэтому он пока недоступен для проведения массовых диагностических исследований в производственных условиях на базе районных и городских ветеринарных лабораторий.

Цель работы. Изучить распространение возбудителя коксиеллеза крупного рогатого скота, а также инфицированность основных его переносчиков в Омской области, и усовершенствовать методы серологической диагностики данной инфекционной болезни.

Задачи исследований:

– изучить эпизоотическую ситуацию по коксиеллезу крупного рогатого скота и ассоциативным формам его проявления в хозяйствах Омской области;

– выяснить инфицированность коксиеллами Бернета основных переносчиков и диких теплокровных хозяев в природных стациях;

– разработать и испытать в производственных условиях экспресс-методы диагностики коксиеллеза крупного рогатого скота и его ассоциативных форм проявления.

Научная новизна. Установлено довольно широкое распространение коксиеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области, при этом коксиеллез носит ассоциативный характер. Изучена инфицированность основных переносчиков и диких теплокровных хозяев возбудителя коксиеллеза (иксодовых клещей и мышеобразных грызунов). Изготовлены антисыворотки и антигены для реакции непрямой иммунофлуоресценции. Сконструирован коксиеллезный эритроцитарный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации. Усовершенствованы экспресс-методы серологической диагностики – для выявления коксиелл и их антигенов в био- и патматериале, а также антител в сыворотке крови и молоке с помощью РНИФ и РНГА.

Получены приоритетные справки: на способ получения сыворотки для диагностики коксиеллеза крупного рогатого скота в реакции непрямой иммунофлуоресценции путем гипериммунизации кроликов № 2009119959 и на способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации № 2009119958.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации вносят определенный вклад в развитие риккетсиологии и микропаразитоценологии. Внедрение в практику разработанных способов получения коксиеллезных антигенов и антисывороток для РНИФ и коксиеллезного эритроцитарного диагностикума для РНГА имеет большое значение в серологической диагностике коксиеллеза крупного рогатого скота в условиях промышленного животноводства. Материалы проведенных исследований легли в основу методических рекомендаций «Применение РИФ и РНГА для диагностики Ку-лихорадки крупного рогатого скота», которые позволят ветеринарным специалистам своевременно выявлять больных животных и носителей, разрабатывать меры борьбы и профилактики, контролировать эпизоотическую обстановку по данной инфекции.

Апробация работы. Материалы исследований доложены и обсуждены на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2007 г.; Межрегиональной научно-практической конференции «Патология сельскохозяйственных животных и пути её профилактики» (Омск, 2007, СО РАСХН ВНИИБТЖ); 14-й научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2008 г. «Проблемы ветеринарной и зоотехнической наук и пути их решения» (Омск, 2008); 7-й Межрегиональной научно-практической конференции «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (Омск, 2008, СО РАСХН ВНИИБТЖ); 15-й научно-практической конференции преподавателей, аспирантов и соискателей ИВМ ОмГАУ, 2009; Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций и патологии животных» (Омск, 19-22 мая 2009 г., СО РАСХН ВНИИБТЖ); Втором этапе всероссийского конкурса на лучшую научную работу Министерства сельского хозяйства РФ (Омск, 2009); Международной научно-практической конференции «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных» (Краснодар, 2009, КубГАУ).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Труды Кубанского государственного аграрного университета»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована таблицами и рисунками. Список литературы включает 218 источников, в том числе 78 зарубежных авторов.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований для практического внедрения отражены в методических рекомендациях: «Применение РИФ и РНГА для диагностики Ку-лихорадки крупного рогатого скота» (Утверждены Ученым советом ИВМ ФГОУ ВПО ОмГАУ, протокол № 2 от 6.10.2009 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области, протокол № 6 от 9.10.2009 г.).

Материалы диссертации внедряются в хозяйствах Омской области и используются в учебном процессе кафедр эпизоотологии, паразитологии инфекционных и инвазионных болезней; микробиологии, вирусологии и иммунологии института ветеринарной медицины ОмГАУ, Омской государственной медицинской академии, НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение коксиеллеза крупного рогатого скота в Омской области.

2. Приготовление опытных серий коксиеллезного антигена и антисыворотки для РНИФ и коксиеллезного эритроцитарного диагностикума для РНГА.

3. Изучение в производственных условиях диагностической ценности РПИФ, РНИФ и РНГА.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

Тема диссертационной работы является составной частью комплексной государственной программы «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» и имеет № гос. регистрации 01.2.001100602.

Исследования проводились в период с 2006 по 2009 гг. на кафедре эпизоотологии, паразитологии, инфекционных и инвазионных болезней ИВМ ОмГАУ, в лаборатории зоонозных инфекций НИИПОИ Роспотребнадзора, в Омской областной ветеринарной лаборатории и хозяйствах Омской области.

Объектом исследований являлся крупный рогатый скот различных половозрастных групп с выраженными клиническими признаками бронхитов, маститов, эндометритов, абортов, а также мышеобразные грызуны и иксодовые клещи.

Материалом для исследований служили сыворотка крови, секрет вымени, цервико-вагинальная слизь от коров и нетелей, сыворотка крови, бронхоальвеолярные смывы, фекалии от телят, сыворотка крови, сперма и препуциальные смывы от быков производителей, патологический материал от погибших животных и абортированных плодов.

В экспериментальных условиях использовали: 4 кроликов (2-х для получения коксиеллезной сыворотки, 2-х для получения кампилобактериозной сыворотки) и 3 морских свинок для постановки биопробы.

Для диагностики применяли эпизоотологический, клинический, патологоанатомический и лабораторные методы. При изучении эпизоотологических особенностей коксиеллеза крупного рогатого скота в Омской области использованы материалы собственных наблюдений, полученные в период выездов в хозяйства, а также данные об инфицированности скота лаборатории микстинфекций кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ИВМ ОмГАУ за 9 лет (1997-2006 гг.).

Для изучения природных очагов Ку-лихорадки было проведено исследование мышеобразных грызунов и иксодовых клещей, собранных на территории Омской области. Данный раздел работы выполнялся при участии научных сотрудников лаборатории зоонозных инфекций НИИПОИ Роспотребнадзора А. К. Танцева и кандидата медицинских наук Г. В. Березкиной. Сбор иксодовых клещей проводился при учёте на волокушу маршрутным методом, а отлов грызунов при помощи ловушек Геро.

Для серологических исследований применяли реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), с целью обнаружения антител в сыворотке крови; реакцию непрямой и прямой иммунофлуоресценции (РНИФ и РПИФ), для обнаружения антител и антигенов в пробах био- и патологического материала, полученного от больных, погибших и вынужденно убитых животных. Фиксацию мазков проводили по методу Моди с соавт. (1958), а постановку РНИФ по методике, предложенной Уэллером и Кунсом (1945).

Для люминесцентной микроскопии использовали микроскоп ЛЮМАМ Р-8 с увеличением в 900 раз, а степень флуоресценции оценивали по 4-х крестной системе.

Для постановки серологических тестов использовали стандартные антигены, применяемые для постановки РА и РСК, и полученный нами коксиеллезный антиген, а в качестве антител – гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические: сальмонеллезную, коксиеллезную для РПИФ люминесцентные сыворотки, меченные ФИТЦ (ИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи), а также полученные нами кроличьи сыворотки против коксиеллеза, кампилобактериоза и ранее полученные в лаборатории микстинфекций против хламидиоза, пастереллеза, диплококкоза (Н. В. Лобанова, 2004).

Коксиеллезный антиген для постановки РНИФ и РНГА получали из вакцинного штамма C. burnetii M-44. Коксиеллезную антисыворотку получали путем гипериммунизации кроликов вышеуказанным антигеном по схеме D. Schimmel, в модификации А. П. Красикова, Н. Н. Новиковой (2000).

Для изготовления эритроцитарного диагностикума для РНГА в качестве клеточной основы использовали эритроциты барана, а для стабилизации 20%-й раствор формальдегида. Фиксацию эритроцитов проводили по методу Фили в модификации А. П. Красикова (2002).

Постановку биопробы на морских свинках проводили, по методике, предложенной А. Б. Дайтером (1980).
2.2. Изучение эпизоотической ситуации по коксиеллезу

крупного рогатого скота, а также ассоциативным формам его

проявления в хозяйствах Омской области

На первом этапе в скрининговых исследованиях биоматериала от коров, телят и быков было установлено, что в настоящее время коксиеллез имеет довольно широкое распространение в Омской области. Так, из 34 обследованных хозяйств коксиеллез зарегистрирован в 15 (44%), при этом в большинстве случаев наряду с коксиеллами выделялись лептоспиры, листерии и хламидии, т.е. инфекционный процесс, носит ассоциативный характер. Инфицированность скота, в среднем составила 9,3% (табл. 1).

Наиболее тяжёлая эпизоотическая ситуация по коксиеллезу наблюдалась в хозяйстве «Россия» Любинского района, где процент инфицированных животных составил 63%, а по лептоспирозу, листериозу и хламидиозу – 32, 37 и 24% соответственно. В другом хозяйстве этого же района – ЗАО им. «Розы Люксембург» риккетсии, листерии и хламидии выделяли у 25% коров и телок, а лептоспиры – у 40%. Не менее тяжёлая ситуация сложилась в Кормиловском, Иссилькульском, Павлоградском и некоторых других районах. Так, в колхозе «Украинский» Иссилькульского района 50% от количества исследуемых проб было инфицировано коксиеллами; такие же показатели по инфицированности лептоспирами и листериями. В Кормиловском районе хозяйства Ермолаевское и Алексеевское также мало, чем отличаются по эпизоотологическим показателям: 30% животных там было инфицировано коксиеллами.
Таблица 1 – Инфицированность скота в хозяйствах Омской области 1997-2006 гг.



п.п.

Хозяйства

К-во

проб

Инфицировано, %

коксиел-лы

лепто-спиры

листе-рии

хлами-дии

1

Знамя

12

-

-

-

17

2

им. Карбышева

20

10

-

-

60

3

им. Розы Люксембург

20

25

40

25

25

4

Боевое

180

5

5

-

30

5

Лесное

7

-

-

-

-

6

Заря свободы

10

20

10

20

70

7

Россия

75

63

32

37

24

8

Искра

10

-

-

-

40

9

Русский хлеб

10

-

-

-

-

10

Сосновское

10

20

-

10

-

11

Колос

10

-

-

-

-

12

Нива

10

-

10

20

60

13

Украинский

10

50

50

50

60

14

Ачаирский-1

10

10

10

-

30

15

Новороссийское

20

10

20

20

20

16

Агрофирма Кормиловская

21

14

10

5

24

17

Молзавод Кормиловский

10

-

40

30

40

18

Ермолаевское

15

30

-

10

20

19

Алексеевское

12

30

-

-

20

20

Большевик

20

-

-

-

-

21

Новоазовское

20

5

-

-

5

22

Цветочное

10

20

20

-

90

23

Береговое

20

-

-

-

80

24

Евгащинское

10

-

-

-

10

25

Новорождественское

20

5

20

-

5

26

Дружба

10

-

-

-

40

27

Чистовское

40

-

-

-

-

28

Добровольское

12

-

-

-

67

29

Руспол

6

-

-

-

60

30

Екатеринославское

10

-

-

-

-

31

Рагозинское

96

-

-

-

-

32

Любимовское

40

-

-

-

33

33

Кам-Курское

24

-

-

-

40

34

им. Кирова

3

-

33

-

33

Всего

813

9,3±1

8,8±1

6,7±0,9

29,5±1,6


В 2007-2009 гг. нами были продолжены комплексные исследования хозяйств на ряд инфекционных болезней. Было подтверждено, что коксиеллез крупного рогатого скота имеет место в хозяйствах Омской области, наряду с другими патологиями.

Проводились исследования материала из хозяйств Таврического, Муромцевского, Любинского, Омского, Кормиловского, Марьяновского, Оконешниковского, Горьковского, Крутинского, Исилькульского, Тюкалинского, Щербакульского, Павлоградского, Тарского, Тевризского, Усть-Ишимского, Саргатского и Азовского районов.

Так, из 29 обследованных хозяйств Ку-лихорадка выявлена в 17 (59%), при этом инфицированность скота составляла от 3 до 65% (в среднем 10,6%). Ретроспективный анализ инфицированности коксиеллами крупного рогатого скота по области за предыдущие 9 лет (1997-2006) показывает примерно такое же процентное соотношение: зараженность скота была в среднем 9,3%.

В результате последних исследований установлено, что во многих хозяйствах области обнаруживаются разные инфекционные патологии, в различных сочетаниях. Так, яркий микробный пейзаж отмечен в ОПХ «Боевое» Исилькульского района, где помимо коксиелл Бернета, выявляли лептоспиры 80%, листерии, хламидии, вирус ИРТ в 30% случаев. В СПК «Некрасовский» Кормиловского района обнаружены лептоспиры и листерии в 60%, вирус ИРТ – 80%, хламидии в 30%, коксиеллы в 20% случаев; в СПК «Любимовском» показано наличие микоплазм у 90% обследованных животных, хламидий – у 80%, вируса ИРТ – у 30. В КФХ «Прометей» в 50% случаев обнаруживали энтерококки, кампилобактерии и вирус ИРТ, у 70% отмечены микоплазмы, у 60% - сальмонеллы, у 40% - хламидии.

Для изучения ассоциированного течения Ку-лихорадки крупного рогатого скота нами были проведены исследования биоматериала от коров, телят и быков, а также патологического материала на несколько инфекционных болезней (табл. 2).
Таблица 2 – Ассоциативные формы проявления Ку-лихорадки крупного рогатого скота


№п.

п.




Хозяйства


К-во

проб

Общий% инф. кокс.

%-от числа исследованных и инфицированных коксиеллами в ассоциации с другими возбудителями

лепт

лист

хлам

ирт

саль

кам

энт

мик

Телята

1

Кирова

10

20



50



50







100

Патологический материал

2

Кам-Курское

14

7



100

100





100





Коровы

3

Овцевод

10

20

50

50

50



50



50



4

Некрасовский

10

20

50

50

100

50









5

Любимовский

10

10





100











6

Ударный

3

33















100

7

Кирова

30

3

100

100

100



100





100

8

Кам-Курское

5

20

100





100

100







9

Боевое

29*

34

100

80

80

60

20

60

40



Всего

121

18,6

±3,5

44

±4,5

48

±4,5

59

±4,5

29

±4,1

30

±4,2

18

±3,5

10

±2,7

33

±4,3

Примечание: * – 2 быка-производителя; кокс. – коксиеллы, лепт. – лептоспиры, лист. – листерии, хлам. – хламидии, ирт – вирус ИРТ-ПВ, саль. – сальмонеллы, кам. – кампилобактерии, энт. – энтерококки, мик. – микоплазмы.
Исследования показывают на возможность ассоциативных форм проявления коксиеллеза в различных сочетаниях с хламидиями, лептоспирами, листериями, вирусом ИРТ-ПВ, сальмонеллами, диплококками, кампилобактериями, микоплазмами. Число сочленов ассоциации микроорганизмов, участвующих в едином инфекционном процессе может достигать 5-7 (табл. 2).

При этом наиболее часто коксиеллы регистрируется с микоплазмами (33%), лептоспирами (44%), листериями (48%), а наибольший процент в ассоциации принадлежит хламидиям – 59%. По всей видимости, такой высокий процент в ассоциации говорит о том, что коксиеллы, как и хламидии, будучи внутриклеточными паразитами, являются симбионтами и синнергируют свое патогенное действие на организм животного.
  1   2

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Биологические аспекты совершенствования крупного рогатого скота в условиях таджикистана
Диссертационная работа выполнена на кафедре разведения и генетики сельскохозяйственных животных Таджикского аграрного университета...

О координации действий по профилактике и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота
Утвердить состав комиссии по координации действий по ликвидации и профилактике лейкоза крупного рогатого скота на территории Трудобеликовского...

А. А. Никишов Методические рекомендации к практическим занятиям по...
В. А. Афанасьев, Е. С. Романов, А. А. Никишов Методические рекомендации к практическим занятиям по бонитировке крупного рогатого...

Проект Развития экспортного потенциала мяса крупного рогатого скота Республики Казахстан
Развитие экспортного потенциала мяса крупного рогатого скота Республики Казахстан на 2011-2020 годы

Скотоводство
Происхождение и характеристика крупного рогатого скота и родственных ему видов, их хозяйственно-биологические особенности. Классификация...

Минимальные требования, предъявляемые к племенным организациям по...

Минимальные требования, предъявляемые к племенным организациям по...

Вопросы вступительного экзамена по специальности для поступающих в магистратуру
Происхождение крупного рогатого скота и краткая характеристика его ближайших сородичей

Реферат Совершенствование схемы профилактики и лечения инфекционного...
В процессе увеличения поголовья герефордского скота на территории Челябинской области наметилась тенденция к широкому распространению...

Костомахин Н. М. Породы крупного рогатого скота / Н. М.
Повышение воспроизводительной способности молочных коров: учеб пособие / под ред. А. Е. Бологова, Е. П. Кармановой. – Спб: Лань,...



База данных защищена авторским правом © 2013
обратиться к администрации
vcvetu.ru