vcvetu.ru:
Советы
Доклады
Лекции

Растения
Цветы
Дерьвья
Огород
Удобрения
Уход

опубликовать

Инструкция 10-19-65- 2005 «лабораторная диагностика бруцеллеза у людей»


НазваниеИнструкция 10-19-65- 2005 «лабораторная диагностика бруцеллеза у людей»
страница1/4
Дата22.04.2013
Размер0.62 Mb.
ТипИнструкция
vcvetu.ru > Цветы > Инструкция
  1   2   3   4


ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 185

Об утверждении Инструкции

4.2. 10-19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей»
В целях исполнения Закона Республики Беларусь «О санитарно-эпидемическом благополучии населения» в редакции от 23 мая 2000 года (Национальный реестр правовых актов Республики Беларусь, 2000 г., № 52, 2/172) постановляю:

1. Утвердить прилагаемую Инструкцию 4.2. 10-19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей» и ввести ее в действие на территории Республики Беларусь с 3 января 2006 г.

2. С момента введения в действие Инструкции 4.2. -19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей» не применять на территории Республики Беларусь «Методические указания по профилактике и лабораторной диагностике бруцеллеза людей» № 28-1/6, утвержденные Начальником Главного управления карантинных инфекций Министерства здравоохранения СССР 21 января 1980 г.

3. Главным государственным санитарным врачам областей и г.Минска довести данное постановление до сведения всех заинтересованных и установить контроль за его выполнением.

М.И. Римжа

УТВЕРЖДЕНО

Постановление

Главного государственного

санитарного врача

Республики Беларусь

21 ноября 2005 № 185

Инструкция 4.2. 10-19-65- 2005

«ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА У ЛЮДЕЙ»


РАЗДЕЛ I

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ

ГЛАВА 1

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Настоящая Инструкция разработана для организации государственного санитарного надзора в части, касающейся проведения лабораторной диагностики бруцеллеза у людей.

2. Настоящая Инструкция предназначена для специалистов бактериологических лабораторий органов и учреждений государственного санитарного надзора, других организаций здравоохранения в части, отнесенной к их компетенции.
ГЛАВА 2

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ВОЗБУДИТЕЛЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

3. Бруцеллез - острое инфекционно-аллергическое, зоонозное заболевание с высокой потенциальной возможностью перехода в хроническую форму. Возбудитель бруцеллеза относится ко второй группе патогенности. Человек в любом возрасте высоко восприимчив к бруцеллезу. Заболевание длительное, трудно поддающееся лечению, поражает практически все органы и системы организма и, как правило, сопровождается хронизацией инфекционного процесса с нередко последующей инвалидностью больного.

4. Возбудителем бруцеллеза являются микроорганизмы, относящиеся к роду Brucella. По международной классификации род Brucella состоит из шести самостоятельных видов, которые подразделяются на ряд биоваров. Так, B.melitensis состоит из трех биоваров, носителями которых являются козы и овцы. B.abortus представлен семью биоварами, основной хозяин возбудителя – крупный рогатый скот. B.suis состоит из пяти биоваров, основной хозяин – свиньи, однако носителем 2-го биовара являются также зайцы, 4-го биовара – олени, а 5-го - мышевидные грызуны. B.neotomae была обнаружена у пустынных кустарниковых крыс. B.ovis выделяется от овец, а B.canis – от собак.

Бруцеллы относятся к патогенным микроорганизмам. Разные виды бруцелл и даже разные штаммы одного и того же вида отличаются неодинаковой вирулентностью. Наиболее патогенны для человека бруцеллы вида B.melitensis, которые нередко вызывают эпидемические вспышки заболевания B.abortus и B.suis вызывают, как правило, спорадические, клинически выраженные случаи заболевания. Что касается B.ovis, B.neotomae и B.canis, то известны случаи заболевания людей, заразившихся от собак бруцеллами вида В.canis, однако эпидемиологическая значимость этих видов бруцелл до конца не изучена.

Бруцеллы всех шести видов практически не отличимы друг от друга по морфологическим признакам. Бруцеллы – микроорганизмы шаровидные, овоидной или палочковидной формы. Размеры бруцелл в среднем равны 0,3-0,6 мкм для кокковых форм и 0,6-2,5 мкм для палочковидных. Спор не образуют, жгутиков не имеют, не подвижны. Красятся анилиновыми красками. При определенных условиях (воздействие специфическим бактериофагом, выращивание на средах с добавлением 10% иммунной сыворотки и тому подобное) образуют капсулу, грамотрицательны, характеризуются замедленным ростом на питательных средах, некоторые штаммы требуют для роста добавления 5-10% CO2, особенно при первоначальном выделении. Оптимальная температура для роста бруцелл 370С, оптимальная рН – 6,8-7,2. Бруцеллы подвержены изменчивости и могут переходить из S –формы в R – и L- формы.

Бруцеллы обладают высокой инвазивностью и могут проникать через неповрежденные слизистые покровы, относятся к внутриклеточным паразитам, но могут также находиться вне клетки.

Бруцеллы мало устойчивы к высокой температуре. В жидкой среде при +600С они погибают через 30 мин., при +80 – 850С – через 5 мин., при кипячении моментально. Обладают большой устойчивость к воздействиям низких температур, длительно сохраняются в пищевых продукта, в том числе хранящихся в холодильниках и морозильных камерах. Под воздействием прямых солнечных лучей бруцеллы гибнут через 4-5 часов, в почве сохраняют жизнеспособность до 100 дней, в воде – до 114 дней.

5. Возбудитель бруцеллеза патогенен для человека и многих видов животных. Основным источником инфекции для людей являются овцы, козы, крупный рогатый скот и свиньи. Отдельные животные остаются носителями бруцелл и выделяют их в течение 5 лет и более. Пути распространения бруцеллеза многообразны, так как бруцеллы выделяются больными животными через все выделительные системы. Распространять возбудителя инфекции могут и животные, не имеющие клинических проявлений бруцеллеза, но положительно реагирующие на бруцеллез. Передача возбудителя бруцеллеза и заражение людей происходит контактным, алиментарным и реже – аэрогенным путем, возможны сочетанные пути передачи.
РАЗДЕЛ II

ОРГАНИЗАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. Диагностические исследования на бруцеллез в регламентированном объеме проводятся лабораториями диагностики особо опасных инфекций Республиканского центра гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (далее – РЦГЭ и ОЗ), областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (далее – ОЦГЭ и ОЗ), бактериологическими лабораториями инфекционных больниц и инфекционных отделений.

7. Организация и выполнение диагностических исследований на бруцеллез в лабораториях должны осуществляться в соответствии с требованиями, регламентирующими:

безопасность работы с микроорганизмами I- II групп патогенности, вся работа по выделению и дифференциации бруцелл из любого исследуемого материала должна проводиться в условиях, предупреждающих возможность инфицирования персонала и обсеменения возбудителем объектов внешней среды;

порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности согласно Руководству «Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности» № 11-7-13-2002, утвержденному Главным государственным санитарным врачом Республики Беларусь 30 декабря 2002 г.

Забор материала от больных с подозрением на бруцеллез производится медицинскими работниками инфекционного стационара, где госпитализирован больной.
ГЛАВА 4

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ И ЕГО РАСТВОРИМЫХ АНТИГЕНОВ

8. Для лабораторной диагностики бруцеллеза у людей применяются три группы методов:

выявление возбудителя заболевания и его растворимых антигенов;

определение специфических антител;

выявление сенсибилизации организма к бруцеллезным антигенам.

9. Характерной особенностью рода Brucella является медленный рост на питательных средах, особенно в первых генерациях. При посевах крови, костного мозга и мочи культуры бруцелл обнаруживаются через 5-10 дней, а иногда через 20-30 дней после засева. При этом первые генерации культур В.abortus и B.ovis способны расти только при наличии в атмосфере повышенного содержания углекислоты (5-10%). Биовары В.abortus 5, 6 и 7 могут расти в обычных аэробных условиях.

Для выделения культур бруцелл рекомендуются следующие среды:

сывороточно-декстрозный агар, агар из картофельного настоя + сыворотка и кровяной агар (5% овечьей крови в среде), Albimi - агар, среда «Д»;

печеночные и мясопептонные агары и бульоны (рН сред - 6,8-7,2). Рецепты питательных сред указаны в приложении 1 к настоящей Инструкции.

Реагенты и среды, используемые для диагностики, должны быть стандартизованы и лицензированы с указанием сроков годности.

10. Исследование крови и другого биологического материала.

Посевы крови рекомендуется делать во время лихорадочного состояния больного, так как, в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Однако не исключена возможность получения гемокультуры и при нормальной температуре. Кровь для посева следует брать до лечения антибиотиками. Посевы крови рекомендуется проводить во флаконы (желательно прямоугольные) емкостью 100-200 мл, в которые наливают по 30-50 мл агара. После стерилизации их укладывают так, чтобы агар застыл на одной из сторон флакона. Затем в каждый флакон стерильно добавляют по 25-30 мл предварительно простерилизованного бульона и выдерживают в термостате при 370С в течение 2-3 суток (агар с бульоном может быть использован не позднее 5-7 дней). Посев крови, пунктатов костного мозга и лимфоузлов производят на питательную среду сразу же после застывания агара и добавления бульона (метод предложен лабораторией бруцеллеза Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи Российской академии медицинских наук ).

Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут шприцем из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона. Один из флаконов инкубируют при повышенном содержании углекислоты (5-10%), а другой - в обычных условиях. Начиная с четвертого дня после посева, флаконы просматривают и при отсутствии роста культуры поверхность агара орошают бульоном. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца бруцеллы не обнаруживаются, то в этом случае делают контрольный высев из бульона на твердую питательную среду. При бактериологическом обследовании больных, прошедших курс лечения антибиотиками, через 1 месяц и спустя 4-6 месяцев после окончания курса антибиотикотерапии, а также больных хронической формой бруцеллеза в период обострения (особенно при субфебрилитете) перед началом лечения рекомендуется проводить посевы крови, пунктатов костного мозга и лимфатических узлов на специальную питательную среду для выделения L-культур бруцелл (состав питательной среды указан в приложении 1 к настоящей Инструкции).

Способ посева бактериологического материала для выделения L-культур идентичен с методом выделения бактериальных гемокультур. Посевы выдерживаются в термостате не менее 35-40 дней.

11. Бруцеллы можно выделить также из костного мозга, мочи, спинномозговой жидкости, экссудата из бурситов, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и так далее. Посевы проводят на твердые и жидкие питательные среды. В случаях исследования загрязненного материала для задержки роста посторонней микрофлоры к среде следует добавлять генцианвиолет из расчета 1:200000. С этой целью также добавляют различные антибиотики, в частности полимиксин - 3 мкг/мл и амфоглюкамин - 3 мкг/мл.

12. Биологический метод. Для выделения бруцелл из материалов, загрязненных посторонней микрофлорой и при малой концентрации бруцелл в исследуемом материале, используются морские свинки (весом 300-350 г) или белые мыши (весом 17-18 г). Исследуемый материал вводят подкожно в паховую область в дозах не более 0,5 мл для мышей и 1 мл для морских свинок.

Вскрытие белых мышей производится через 20-25 дней, а морских свинок - через 30-35 дней после введения исследуемого материала. Перед вскрытием у свинок следует взять кровь из сердца для исследования сыворотки в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут целиком лимфатические узлы (регионарные к месту введения исследуемого материала): паховые, подчелюстные, шейные, парааортальные, кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей лимфатические узлы: паховые, акселярные, парааортальные, подчелюстные, кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селезенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг для засева берут пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, а также мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательные среды (агар и бульон). Лимфатические узлы животных перед посевом рекомендуется надсекать ножницами. После этого каждый лимфатический узел и кусочки органов (по возможности больше) берут «уколом» стерильной деревянной палочки (палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом) и вносят первоначально в пробирку с агаром, где той же палочкой материал раздавливают и тщательно втирают в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. После использования палочки погружают на 1 час в дезраствор (5% раствор фенола), затем автоклавируют, после чего тщательно промывают и стерилизуют для последующего употребления. Посевы выдерживают при 370С в термостате 20-25 дней. Просмотр посевов на пробирках с агаром и бульоном производят каждые 3-4 дня, из помутневших бульонов делают высевы на пробирки со скошенным агаром.

Результат исследования оценивается положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл из организма животного или при наличии положительной реакции Райта у животных в титре не менее 1:20.

ГЛАВА 5

МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БРУЦЕЛЛ

13. Для определения принадлежности выделенных культур к роду Brucella можно использовать методы:

изучение морфологии колоний;

микроскопия окрашенных препаратов по Граму или Козловскому;

люминесцентная микроскопия;

проба со специфической сывороткой в реакции агглютинации на стекле.

14. Морфология колоний. Колонии бруцелл на агаре бесцветны, выпуклы (холмиком), с гладкой поверхностью, гомогенны, иногда с нежной зернистостью в центре колонии. С возрастом нежные и прозрачные колонии постепенно мутнеют.

Величина колоний может быть различной. Наряду с крупными, достигающими в диаметре 3-4 мм и больше, могут быть очень мелкие -точечные колонии 0,1-0,05 мм. Различные факторы (рН питательной среды, влажность, наличие бактериофага в культуре и др.), влияющие на биологию культуры, могут привести также к изменению внешнего вида колоний (встречаются зернистые, стекловидные колонии, растущие в толще агара, эрозированные, сухие, слизистые, радиально исчерченные и другие).

Для изучения структуры колоний целесообразно использовать стереоскопическую лупу МБС-1 или обычный микроскоп с объективом наименьшего увеличения.

15. Микроскопия окрашенных препаратов. При окраске по Граму бруцеллы грамотрицательны (окрашиваются в красный цвет). Окрашивание препаратов по способу Козловского: препараты, фиксированные на пламени горелки или спиртовки, окрашивают 0,5% водным раствором сафранина при подогревании до появления пузырьков, промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором малахитовой или бриллиантовой зелени в течение 40-50 секунд. Бруцеллы сохраняют красную окраску сафранина, а остальные бактерии окрашиваются в зеленый цвет.

16. Проба со специфической сывороткой. Для предварительной, быстрой идентификации ставят реакцию агглютинации на стекле. На предметное стекло наносят каплю специфической сыворотки, разведенной 1:25 0,5% карболизированным физиологическим раствором, в которой эмульгируется одна петля исследуемой культуры. В положительных случаях быстро (в течение 1 минуты) наступает агглютинация с образованием хорошо выраженных хлопьев, в отрицательных - суспензия остается гомогенной. Для контроля исследуемую культуру эмульгируют в капле нормальной сыворотки или физиологическом растворе.

17. При люминесцентной микроскопии в положительных случаях наблюдается специфическое свечение клеток возбудителя на 3-4 креста по периферии микробной клетки, центральная часть при этом остается неокрашенной. Реакция иммунофлюоресценции, прямой метод указан в пунктах 41 – 43 главы 10 настоящей Иструкции.
  1   2   3   4

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Бактериальные болезни птиц и их лабораторная диагностика
Оптимальное обеспечение жизненных потребностей птиц, направленное на сохранение их здоровья и продуктивности, резистентности к неблагоприятным...

Наставление по диагностике бруцеллеза животных
От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз

Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза....
Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Кампилобактериоз

Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами
Инструкция переработана с учетом научных достижений и внедрения в практику новых средств борьбы с гельминтозами животных

Теплица «Садовод» инструкция по сборке Общие указания
Настоящая инструкция распространяется на теплицу «Садовод», предназначенную для создания микроклимата, благоприятного для выращивания...

Диагностика порчи в домашних условиях

72. инструкция по изготовлению рыбы горячего копчения
Инструкция предусматривает порядок изготовления рыбы горячего копчения всех видов (кроме осетровых и хрящевых рыб), соответствующих...

Корневые и прикорневые гнили плодовых и ягодных культур, диагностика и меры борьбы

Пресс-служба фракции «Единая Россия» Госдума РФ мониторинг сми 7 июня 2005 г
Московский комсомолец, Гришин Александр, Приходько Виктория, Семенова Ираида, 07. 06. 2005, №124, Стр. 3 31

Инструкция эксплуатации человеческого тела" авторская методика "
Полная методика изложена (авторская) изложена в книге будилова сергея алфеевича "Инструкция эксплуатации человеческого тела"( авторская...



База данных защищена авторским правом © 2013-2019
обратиться к администрации
vcvetu.ru