vcvetu.ru:
Советы
Доклады
Лекции

Растения
Цветы
Дерьвья
Огород
Удобрения
Уход

опубликовать

Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов


Скачать 240.98 Kb.
НазваниеНаучно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов
Дата24.04.2013
Размер240.98 Kb.
ТипРегламент
ФЕДЕРАЛЬНОЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ АГЕНТСТВО

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ «НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИИ И ГИГИЕНИЧЕСКОЙ РЕГЛАМЕНТАЦИИ БИОПРЕПАРАТОВ» (ФГУН НИЦ ТБП ФМБА России)







ОТЧЕТ

Изучение иммунотоксического действия субстанции и лекарственных форм препарата КИЛЛЕВИР

(Договор ЦТ 14/2005)





Руководитель исследований

доктор медицинских наук ( J/f/~j. ^^_ А.А. Денисов




Серпухов - 2005

СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ







Начальник отдела молекулярной генетики и иммунологии, доктор медицинских наук

Ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук

Младший научный сотрудник

Научный сотрудник

Научный сотрудник

Младший научный сотрудник

Младший научный сотрудник

Лаборант-исследователь

Лаборант-исследователь

Лаборант-исследователь

А.А. Денисов

Л.В. Михина

О.М. Рыбакова

Ю.С. Дороватовская

А.В. Третьякова

С.А. Попова

СВ. Мельникова

Е.Н. Соколова

И.А. Николайчук

И.В. Козлова

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АФ

ГЗТ

ДМСО

ИР

ИФ

ПМФ

ТД

ЭБ

активность фагоцитоза гиперчувствительность замедленного типа диметилсульфоксид индекс реакции интенсивность фагоцитоза перитонеальные макрофаги терапевтическая доза эритроциты барана

РЕФЕРАТ

Объем отчета - 20 страниц, таблиц - 4, список литературы - 4 наименования.

Ключевые слова: доклинические исследования, иммунотоксическое действие, фуллеренполиаминокапроновая кислота, лекарственный препарат киллевир

Цель настоящего исследования — выявление иммунотоксического действия субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир.

Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота. Препарат киллевир инъекционная форма - это раствор субстанции в 3% ДМСО, препарат киллевир суппозитории ректальные, помимо ДМСО, содержит витепсол.

При изучении иммунотоксического действия исследуемых лекарственных средств оценивали способность иммунной системы мышей гибридов первого поколения Fi(CBAxC57Bl/6) отвечать на введение неинфекционного антигена. В качестве антигена использовали эритроциты барана, являющиеся экспериментальным Т-зависимым тест-антигеном, наиболее полно моделирующим различные варианты чужеродного агента. Выявляли уровни клеточного и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Оценивали также функциональную активность системы мононуклеарных фагоцитов и уровень комплемента в сыворотках крови (на морских свинках).

Реактивность иммунной системы изучали после введения субстанции и инъекционной формы препарата киллевир - 14-кратно внутрибрюшинно, суппозиторий -14-кратно ректально. Исследованный уровень доз: предполагаемые в клинике терапевтические (по содержанию субстанции - 0,7 мг/кг для инъекционной формы препарата и 0,14 мг/кг — для суппозиториев ректальных) и в 10 раз их превышающие.

В результате проведенного исследования установили, что субстанция (фуллеренполиаминокапроновая кислота), инъекционная форма препарата киллевир и суппозитории ректальные не обладают иммунотоксическим действием на млекопитающих. У экспериментальных животных не выявлено случаев отклонения изученных параметров от уровня контроля.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ : 6

  1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 7

  2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 12




  1. Изучение воздействия субстанции и двух лекарственных форм
    препарата киллевир на иммунный ответ против эритроцитов барана 12

  2. Изучение воздействия субстанции и двух лекарственных форм
    препарата киллевир на фагоцитарную активность клеток системы
    мононуклеарных фагоцитов 15

2.3 Изучение воздействия субстанции и двух лекарственных форм
препарата киллевир на уровень комплемента в сыворотках крови
морских свинок 16

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 18

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 20

ВВЕДЕНИЕ

Под иммунотоксичностью фармакологических средств понимаются побочные, опасные для здоровья некомпенсированные нарушения в структуре и функции иммунной системы, которые могут привести к снижению резистентное™ организма к инфекции, повышению риска онкологических заболеваний, развитию аутоиммунной патологии. Выявление таких поражений иммунной системы у разрабатываемых фармакологических препаратов является обязательным этапом их доклинической оценки.

Цель настоящего исследования - выявление иммунотоксического действия субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир. Препарат предполагается использовать как противовирусное, в частности, противогерпетическое лекарственное средство.

Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота.

Состав препарата киллевир, инъекционная форма:

  • фуллеренполиаминокапроновая кислота — 50 мг,

  • ДМСО – 0,5 мл,

  • вода для инъекций — 2 мл.

Состав препарата киллевир, суппозитории ректальные:

  • фуллеренполиаминокапроновая кислота — 10 мг,

  • ДМСО- 150 мг,

  • Персиковое масло – 40 мг,

  • витепсол — до 2 г.

Работа выполнена в соответствии с «Методические указания по оценке иммунотоксического действия фармакологических веществ» Фармакологического комитета МЗ РФ [1].

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа приведена в соответствии с Методическими указаниями [1].

Лабораторные животные

Эксперименты выполнены на мышах гибридах первого поколения Fi(CBAxCs7Bl/6) с массой тела 25+2 г и на морских свинках с массой тела 380±40 г. Животные приобретены в питомниках «Столбовая» (мыши) и «Крюково» (морские свинки). Содержание животных в виварии НИЦ ТБП соответствовало санитарным правилам, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г., по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) [4].

Для кормления использовали полнорационные комбикорма для грызунов, поение осуществляли водопроводной водой. Животные прошли карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение не менее 14 дней.

Экспериментальные группы животных формировали методом случайной выборки с учетом массы тела в качестве ведущего показателя.

Приготовление растворов исследуемых фармакологических средств На исследования представлены:

  1. субстанция препарата киллевир фуллеренполиаминокапроновая кислота;

  2. концентрат лекарственного препарата киллевир, инъекционная форма:




  • фуллеренполиаминокапроновая кислота — 50 мг,

  • ДМСО – 0,5 мл,

  • вода для инъекций - 2 мл;

3) лекарственный препарат киллевир, суппозитории ректальные:

  • фуллеренполиаминокапроновая кислота-10 мг,

  • ДМСО - 150 мг,

  • Персиковое масло – 40 мг,

  • витепсол — до 2 г.

Растворы субстанции и лекарственных форм для введения готовили и расфасовывали при соблюдении правил антисептики и асептики, в ламинарном боксе при вертикальном потоке стерильного воздуха.

Субстанция

Концентрат раствора субстанции готовили в ДМСО таким образом, чтобы при последующем разведении в физиологическом растворе расчетную дозу вводить в 3% ДМСО.

Лекарственный препарат киллееир, инъекционная форма

Предполагаемая для испытаний в клинике терапевтическая доза препарата киллевир по содержанию субстанции - 0,7 мг/кг (1 ТД); и доза, в 10 раз ее превышающая -7 мг/кг (10 ТД).

Перед введением концентрат (3 мл) растворяли в 30 мл воды для инъекций, полученный раствор — раствор А.

10 ТД:

  • При массе тела мыши 20 г доза составляет 0,14 мг/особь по содержанию субстанции.
    0,14 мг субстанции содержится в 0,08 мл Раствора А. Вводили по 0,08 мл Раствора А
    каждой особи при массе тела 20 г.

  • При массе тела морской свинки 330 г доза составляет 2,3 мг/особь (по содержанию
    субстанций). 2,3 мг субстанции содержится в 1,4 мл Раствора А. Вводили 1,4 мл
    Раствора А каждой особи при массе тела 330 г.

1ТД:

  • При массе тела мыши 20 г доза составляет 0,014 мг/особь по содержанию субстанции.
    Раствор В получали 10-кратным разведением Раствора А 3% ДМСО. Раствор В
    содержит в 0,08 мл 0,014 мг субстанции. Вводили по 0,08 мл Раствора В каждой особи
    при массе тела 20 г.

  • При массе тела морской свинки 330 г доза составляет 0,23 мг/особь по содержанию
    субстанции. 0,23 мг субстанции содержится в 0,14 мл Раствора А. Вводили по 0,14 мл
    Раствора А каждой особи при массе тела 330 г.

Лекарственный препарат киллевир суппозитории ректальные

Предполагаемая для испытаний в клинике терапевтическая доза препарата

киллевир в суппозиториях ректальных по содержанию субстанции: 1 ТД — 0,14 мг/кг и

доза, в 10 раз ее превышающая 10 ТД — 1,4 мг/кг. 10 ТД:

  • При массе тела мыши 20 г доза составляет 0,028 мг/особь по содержанию субстанции,
    указанная доза содержится в 5,6 мкл лекарственной формы. Вводили по 6,0 мкл
    препарата киллевир каждой особи при массе тела 20 г.

  • При массе тела морской свинки 330 г доза составляет 0,467 мг/особь по содержанию
    субстанции, указанная доза содержится в 93 мкл лекарственной формы. Вводили по 95
    мкл препарата киллевир каждой особи при массе тела 330 г.

1ТД:

  • При массе тела мыши 20 г доза составляет 0,0028 мг/особь по содержанию субстанции,
    указанная доза содержится в 0,56 мкл лекарственной формы. Лекарственную форму с
    помощью плацебо для ректальной формы разводили в 10 раз (Разведение С), вводили
    по 6,0 мкл Разведения С каждой особи при массе тела 20 г.

  • При массе тела морской свинки 330 г доза составляет 0,047 мг/особь по содержанию
    субстанции, указанная доза содержится в 9,3 мкл лекарственной формы.
    Лекарственную форму с помощью плацебо для ректальной формы разводили в 10 раз
    (Разведение О. вводили по 95 мкл Разведения С каждой особи при массе тела 330 г.

Плацебо

  1. Плацебо для инъекционной формы — раствор 3% ДМСО, приготовленный на
    воде для инъекций. Вводили по 0,08 мл на особь при массе тела 20 г (мыши) или по 1,4 мл
    при массе тела 330 г (морские свинки).

  1. Плацебо для суппозиториев:




  • ДМСО-200 мг,

  • витепсол - до 2 г.

Вводили по 6,0 мкл на одну особь при массе тела 20 г (мыши) или по 95 мкл на одну особь при массе тела 330 г (морские свинки).

Оценка воздействия лекарственных средств на клеточный иммунный ответ После последнего введения исследуемого лекарственного средства мышей гибридов первого поколения Fi(CBAxCs7Bl/6) иммунизировали суспензией ЭБ однократно внутрибрюшинно в дозе 2x106 клеток в физиологическом растворе.

Клеточный иммунитет оценивали через 5 суток после иммунизации в тесте отека лапки мыши, выявляя ГЗТ в ответ на введение разрешающей дозы антигена - 0,5-1x10 эритроцитов в 0,05 мл физиологического раствора. Реакцию ГЗТ оценивали через 24 часа, рассчитывая индекс реакции (ИР) по разнице в весе опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок по формуле:

ИР = Ро~Рк х 100 Рк

Сравнивали значения показателей ИР в опытных и контрольных группах животных.

10

Оценка воздействия лекарственных средств на гуморальный иммунный ответ После последнего введения исследуемого лекарственного средства мышей

гибридов первого поколения Fi(CBAxCs7Bl/6) иммунизировали суспензией ЭБ

однократно внутрибрюшинно в дозе 1x10 клеток в физиологическом растворе.

Гуморальный иммунный ответ выявляли через 7 суток по уровню гемагглютининов в

сыворотках крови экспериментальных животных.

Реакцию гемагглютинации проводили в микропланшетах, в рядах двукратных

разведений сывороток, используя 2 % суспензию ЭБ в физиологическом растворе.

Оценивали разницу титров гемагглютининов в группах мышей, получавших исследуемые

лекарственные средства, и в группах контроля.

Оценка показателей Фагоцитарной активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов »

Для оценки фагоцитарной активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов использовали ПМФ морских свинок, выделенные после воздействия испытуемых лекарственных средств.

В качестве объекта фагоцитоза использовали клетки суточной культуры Staphylococcus aureus, инактивированные прогреванием. Получали монослой макрофагов на покровном стекле, культивируя клетки перитонеального экссудата, ресуспендированные в среде 199 (1х106 кл/мл), при 37 °С в течение 60 мин. После добавления в среду культивирования суспензии S. aureus в соотношении микробная клетка : макрофаг = 50 : 1 фагоцитоз проходил в течение 40 мин. Затем монослой ПМФ пятикратно отмывали от оставшихся в культуральной среде бактерий, фиксировали 96° этанолом, окрашивали азур-эозином и просматривали под иммерсионной системой светового микроскопа. Просматривали не менее 100 макрофагов в каждом цитологическом препарате.

Рассчитывали активность фагоцитоза (АФ, процент макрофагов, поглотивших бактерии) и интенсивность фагоцитоза (ИФ, среднее количество бактерий в одном фагоците).

Оценка уровня комплемента в сыворотках крови *

Уровень комплемента в сыворотках крови морской свинки оценивали в тест-системе с гемолитической сывороткой [2]. В лунки микропланшетов с разведениями исследуемых сывороток крови добавляли 3%-ную суспензию ЭБ, сорбированных

11

гемолитической сывороткой. После экспозиции микропланшетов при 37°С в течение 1 часа оценивали гемолиз эритроцитов визуально. За титр комплемента в исследуемой сыворотке принвдали последнее (в ряду двукратных) разведение сыворотки, вызывающее полный гемолиз эритроцитов.

Статистическая обработка данных

Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием критерия Стьюдента [3].

12 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Иммунотоксическое действие субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир изучали на двух видах лабораторных животных (мышах и морских свинках) при 14-кратном введении ректально и внутрибрюшинно.

Исследованные дозы выбраны в соответствии с предполагаемыми терапевтическими дозами препарата киллевир: для инъекционной формы — 0,7 мг/кг (по содержанию субстанции), для суппозиториев ректальных - 0,14 мг/кг (по содержанию субстанции).

Оценку состояния иммунной системы проводили в рекомендуемых тестах [2] по окончании введения испытуемых лекарственных средств в терапевтической дозе и в дозе, в 10 раз ее превышающей.

2.1. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ СУБСТАНЦИИ И ДВУХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРЕПАРАТА КИЛЛЕВИР НА ИММУННЫЙ ОТВЕТ ПРОТИВ ЭРИТРОЦИТОВ БАРАНА

Исследование проведено на самках мышей гибридов первого поколения Fi(CBAxC57Bl/6).

Субстанцию и инъекционную форму препарата киллевир вводили мышам 14-кратно внутрибрюшинно в дозах 0,70 мг/кг и 7,00 мг/кг по содержанию субстанции. Препарат киллевир, суппозитории ректальные вводили мышам 14-кратно ректально в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг (по содержанию субстанции). Группы контроля №1 представлены животными, получавшими плацебо: 3 % ДМСО — для субстанции и инъекционной лекарственной формы, витепсол в ДМСО - для суппозиториев, группы контроля №2 представлены интактными животными. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 20 животных. После последнего введения лекарственного средства мышей экспериментальных и контрольных групп однократно внутрибрюшинно иммунизировали эритроцитами барана.

Клеточный иммунный ответ оценивали в реакции ГЗТ по величине отека лапки мыши в ответ на введение разрешающей дозы антигена. Иммунизирующую дозу ЭБ для групп мышей, предназначенных для выявления клеточного иммунного ответа, содержащую 2x106 клеток в 0,5 мл физиологического раствора. Разрешающую дозу ЭБ -0,5x108 клеток в 0,05 мл физиологического раствора вводили через 5 суток после иммунизации, индекс реакции (ИР) определяли спустя 24 часа.

13

В результате проведенного исследования установлено, что в группах мышей, подвергавшихся воздействию каждого из испытуемых лекарственных средств в дозе, десятикратно превышающей терапевтическую, значения ИР ГЗТ достоверно превышали значения ИР в группах контролен №2 (Табл. 1). Такие же данные получены для группы мышей, получавших инъекционную форму препарата киллевир в терапевтической дозе. При сравнении указанных значений ИР ГЗТ с группами контроля №1 (Табл. 1) разница оказалась недостоверной. В таких случаях говорят об изменениях, обусловленных стрессорным воздействием длительного курса введения, а не воздействием самого лекарственного средства.

Таким образом, исследуемые лекарственные средства в предполагаемых для использования в клинике терапевтических дозах и в дозах, в 10 раз их превышающих, не оказывали воздействия на клеточный иммунный ответ мышей против эритроцитов барана.

Таблица 1. Оценка клеточного иммунного ответа на эритроциты барана

Лекарственное средство

ЭБ, доза на особь:

ИР ГЗТ, %, М±П1

Наименование

Доза, мг/кг

иммунизирующая

разрешающая

Субстанция

0,70

2x106

0,5x10*

32,64±2,2б

7,00

2хЮ6

0,5хЮ8

31,93+1,37*

Контроль №1 (плацебо)

2x106

0,5x108

27,39±1,61

Контроль №2 (интактные)

2x106

О,5хЮ8

25,90±1,36

Киллевир (инъекционная форма)

0,70

2x106

О,5хЮ8

34,61+2,97*

7,00

2x106

0,5хЮ8

34,81+1,71*

Контроль №1 (плацебо)

2x106

0,5х108

28,57±2,62

Контроль №2 (интактные)

2x106

О,5хЮ8

25,90±1,36

Киллевир (суппозитории ректальные)

0,14

2x106

О,5хЮ8

25,94+2,26

1,40

2x106

0,5хЮ8

32,64±3,01*

Контроль №1 (плацебо)

2x106

0,5хЮ8

25,67+2,62

Контроль №2 (интактные)

2x106

0,5хЮ8

20,3411,43

'Примечание: достоверно выше уровня контроля Ш 2.

14

Гуморальный иммунный ответ оценивали по уровню гемагтлютининов в сыворотках крови, полученных через 7 суток после иммунизации. Иммунизирующая доза для групп мышей, предназначенных для выявления гуморального иммунного ответа, составляла 1хЮ8 ЭБ в объеме 0,5 мл.

Полученные результаты представлены в Iog2 титра гемагглютининов (Табл. 2). Уровень антител к ЭБ в группах мышей, подвергавшихся воздействию исследуемых лекарственных средств, не отличался от значений в контрольных группах.

Таблица 2.

Оценка гуморального иммунного ответа на эритроциты барана

Лекарственное средство

Иммунизирующая доза ЭБ

Iog2 титра сыворотки, M±m

Наименование

Доза, мг/кг

Субстанция

0,70

1хЮ8

8,82±0,17

7,00

1хЮ8

8,52±0,25

Контроль №1 (плацебо)

lxlO8

8,72+0,22

Контроль №2 (интактные)

lxlO8

8,7010,23

Киллевир (инъекционная форма)

0,70

lxlO8

7,82±0,43

7,00

lxlO8

7,42±0,35

Контроль №1 (плацебо)

lxlO8

7,82±0,34

Контроль №2 (интактные)

lxlO8

7,58±0,42

Киллевир (суппозитории ректальные)

0,14

lxlO8

9,12+0,25

1,40

lxlO8

9,62±0,15

Контроль №1 (плацебо)

lxlO8

9,52+0,13

Контроль №2 (интактные)

lxlO8

9,28±0,21

Субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир в терапевтических дозах, предполагаемых для использования в клинике, и в дозах, в 10 раз их превышающих, не влияли на уровень гуморального иммунного ответа мышей на эритроциты барана.

15

В связи с тем, что при введении исследуемых лекарственных средств не было отмечено изменений в уровнях клеточного и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана по сравнению с контролем, нет необходимости проводить оценку иммунного статуса через 21 сутки после прекращения введения лекарственных средств.

2.2. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ СУБСТАНЦИИ И ДВУХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРЕПАРАТА КИЛЛЕВИР НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК СИСТЕМЫ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ

Исследование проведено на морских свинках. Субстанцию и инъекционную форму препарата киллевир вводили морским свинкам 14-кратно внутрибрюшинно в дозах 0,70 мг/кг и 7,00 мг/кг по содержанию субстанции. Препарат киллевир в суппозиториях вводили морским свинкам 14-кратно ректально в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг по содержанию субстанции. Группы контроля представлены животными, получавшими плацебо: 3 % ДМСО — для субстанции и инъекционной лекарственной формы, витепсол в ДМСО - для суппозиториев. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных.

Перитонеальные макрофаги выделяли после последнего введения лекарственного средства, фагоцитарную активность оценивали in vitro по отношению к убитым прогреванием клеткам Staphylococcus aureus. Рассчитывали активность фагоцитоза и интенсивность фагоцитоза.

В результате проведенного исследования не были выявлены достоверные различия в значениях показателей фагоцитарной активности макрофагов у животных из опыта и контроля (Табл. 3). Поглотительная способность клеток системы мононуклеарных фагоцитов после 14-кратного введения исследуемых лекарственных средств не изменялась.

Субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир в терапевтических дозах, предлагаемых для использования в клинике, и в дозах, в 10 раз их превышающих, не влияли на функциональную активность макрофагов.

16

Таблица 3. Оценка фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов морской свинки

Лекарственное средство

АФ (%), М±т

ИФ (бактериальные клетки), М + т

Наименование

Доза, мг/кг

Субстанция

0,70

86,0±2,5

7,2+0,8

7,00

85,3+1,8

7,7+1,1

Контроль (плацебо)

87,5+2,1

7,3+1,4

Киллевир (инъекционная форма)

0,70

83,2±2,4

6,9±0,6

7,00

85,8+2,4

7,2+0,9

Контроль(плацебо)

84,3±2,7

7,2±1,2

Киллевир (суппозитории ректальные)

0,14

91,3±2,2

7,7+1,1

1,40

87,4£2,0

8,0+1,1

Контроль(плацебо)

88,5±2,8

7,8±1,3

2.3. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ СУБСТАНЦИИ И ДВУХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРЕПАРАТА КИЛЛЕВИР НА УРОВЕНЬ КОМПЛЕМЕНТА В СЫВОРОТКАХ КРОВИ МОРСКИХ СВИНОК

Исследование проведено на морских свинках. Субстанцию и инъекционную форму препарата киллевир вводили морским свинкам 14-кратно внутрибрюшинно в дозах 0,70 мг/кг и 7,00 мг/кг (по содержанию субстанции). Препарат киллевир в суппозиториях вводили морским свинкам 14-кратно ректально в дозах 0,14 мг/кг и 1,40 мг/кг по содержанию субстанции. Группы контроля представлены животными, получавшими плацебо: 3 % ДМСО - для субстанции и инъекционной лекарственной формы, витепсол в ДМСО - для суппозиториев. В каждую экспериментальную и контрольные группы брали по 10 животных.

Кровь брали из ушной вены морских свинок на следующие сутки после последнего введения лекарственных средств, уровень комплемента выявляли в тест-системе с гемолитической сывороткой. Реакцию оценивали визуально, за титр комплемента

. ■ . 17

принимали последнее разведение сыворотки (в ряду двукратных), вызывающее полный гемолиз эритроцитов.

Приведенные в Табл. 4 данные свидетельствуют об отсутствии изменений в уровне комплемента у морских свинок после 14-кратного введения исследуемых лекарственных средств в терапевтической дозе и в дозе, десятикратно ее превышающей. Субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир в терапевтических дозах, предлагаемых для использования в клинике, и в дозах, в 10 раз их превышающих, не влияли на функциональную активность макрофагов.

Таблица 4. Оценка уровня комплемента в сыворотках крови морских свинок

Лекарственное средство

Уровень комплемента (Iog2 титра), М + m

Наименование

Доза, мг/кг

Субстанция

0,70

5,60+0,37

7,00

5,60±0,37

Контроль(плацебо)

5,50±0,51

Киллевир (инъекционная форма)

0,70

5,80±0,56

7,00

6,20±0,45

Контроль(плацебо)

5,70±0,48

Киллевир (суппозитории ■ ректальные)

0,14

5,70+0,35

1,40

5,90+0,41

Контроль(плацебо)

5,60+0,37

18

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Под иммунотоксичностью фармакологических средств понимаются побочные, опасные для здоровья некомпенсированные нарушения в структуре и функции иммунной системы, которые могут привести к снижению резистентности организма к инфекции, повышению риска онкологических заболеваний, развитию аутоиммунной патологии. Основная задача доклинического контроля иммунотоксичности потенциальных лекарственных средств состоит в том, чтобы в экспериментах на животных доказать или исключить возможность нежелательных последствий реакций иммунной системы, вызванных лекарственными средствами или их метаболитами.

Цель настоящего исследования - выявление иммунотоксического действия субстанции и двух лекарственных форм препарата киллевир.

Субстанцией препарата киллевир является фуллеренполиаминокапроновая кислота.

Состав препарата киллевир, инъекционная форма:

  • фуллеренполиаминокапроновая кислота - 50 мг,

  • ДМСО - 1мл,

  • вода для инъекций — 2 мл.

Состав препарата киллевир, суппозитории ректальные:

  • фуллеренполиаминокапроновая кислота— 10 мг,

  • ДМСО-200 мг,

  • витепсол - до 2 г.

При изучении иммунотоксического действия исследуемых лекарственных средств оценивали способность иммунной системы мышей гибридов первого поколения Fi(CBAxC57Bl/6) отвечать на введение неинфекционного антигена. Этот процесс, в котором в кооперативном взаимодействии участвуют все основные клетки иммунной системы, включает главные этапы иммунного реагирования (фагоцитоз, распознавание и презентация антигена, активация, пролиферация, синтез специфических антител и т.п.). В качестве антигена использовали эритроциты барана, являющиеся экспериментальным Т-зависимым тест-антигеном, наиболее полно моделирующим различные варианты чужеродного агента. Выявляли уровни клеточного и гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Оценивали также функциональную активность системы мононуклеарных фагоцитов и уровень комплемента в сыворотках крови на морских свинках.

Реактивность иммунной системы изучали после введения субстанции и инъекционной формы препарата киллевир — 14-кратно внутрибрюшинно, препарата

19

киллевир в суппозиториях — 14-кратно ректально. Исследованный уровень доз: предполагаемые в клинике терапевтические по содержанию субстанции - 0,7 мг/kr для инъекционной фррмы препарата и 0,14 мг/кг — для суппозиториев ректальных, и в 10 раз их превышающие.

В результате проведенного исследования установили, что субстанция и обе лекарственные формы препарата киллевир: инъекционная и суппозитории ректальные не обладают иммунотоксическим действием на млекопитающих. У экспериментальных животных не выявлено случаев отклонения изученных параметров от уровня контроля.

20

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Методические указания по оценке иммунотоксического действия фармакологических
    веществ / Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
    фармакологических веществ (ред. Фисенко В.П. и др.)- - М: Фармакологический
    комитет МЗ РФ. - 2000. - С. 33 - 38.

  2. Иммунологические методы (ред. Фримель X.). - М.: Мир. - 1987. - 472 с.

  3. Статистическая обработка результатов доклинических испытаний // Руководство по
    экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.
    - М.: Фармакологический комитет МЗ РФ. - 2000. - С. 360-385.

t

4. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-
биологических клиник (вивариев). - М.: МЗ РФ. - 1973.

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Влияние удобрений, витавакса и биопрепаратов на урожайность и качество...
Работа выполнена в гну всероссийский научно-исследовательский институт агрохимии им. Д. Н. Прянишникова Россельхозакадемии

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук
Работа выполнена в филиале "Научно-исследовательский институт овцеводства" тоо "Казахский научно-исследовательский институт животноводства...

Министерство сельского хозяйства российской федерации федеральное агентство по рыболовству
Федеральным государственным унитарным предприятием «Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный Центр» на сырье, полуфабрикаты,...

Агроэкологическая эффективность применения органических и минеральных...
Работа выполнена в лаборатории органического вещества почв и органических удобрений гну всероссийский научно – исследовательский...

Возможность коррекции репродуктивной функции у коров при различных...
Гну скзниви) и Организации научного обеспечения «Северо-Западный Центр научного обеспечения» (оно сзцно) Государственного научного...

Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства расхн
Ученым советом гну «Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства расхн» и Научно-техническим советом Министерства...

Научно-практический центр нан беларуси по картофелеводству и плодоовощеводству
...

Республиканское государственное казённое предприятие Казахский научно-исследовательский...
Постановлением Совета Министров Казахской сср №280 от 03. 04. 1959г на базе плодового отдела Казахского научно-исследовательского...

Научно-практическое обоснование продуктивно-биологических характеристик...
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства Российской...

Карагандинский научно-исследовательский институт растениеводства и селекции
Тоо «Карагандинский научно-исследовательский институт растениеводства и селекции»



База данных защищена авторским правом © 2013-2019
обратиться к администрации
vcvetu.ru